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离心方法
离心方法根据目的不同可分为制备离心和分析离心。制备离心法又可分为两大类型：差速离心法与密度梯度区带离心法。
(一）差速离心法
采用逐渐增加离心速率或低速与高速交替进行离心，使沉降速率不同的颗粒，在不同离心速率及不同离心时间下分批离心的方法，称为差速离心法。差速离心一般用于分离沉降系数相差较大的颗粒。进行差速离心时.首先要选择好颗粒沉降所需的离心力和离心时间，离心力过大或离心时间过长，容易导致大部分或全部颗粒沉降及颗粒被挤压损伤。当以一定离心力在一定的离心时间内进行离心时，在离心管底部就会得到最大和最重颗粒的沉淀，进一步加大转速对分出的上清液再次进行离心，又得到第二部分较大、较重颗粒的沉淀及含更小而轻颗粒的上清液。如此多次离心处理，即能把液体中的不同颗粒较好地分离开。此法所得沉淀是不均一的，仍混杂有其他成分，需经再悬浮和再离心（2一3次)，才能得到较纯的颗粒。差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。其优点是:操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子。缺点是:①分离效果差，不能一次得到纯颗粒;②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀;③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。
(二)密度梯度区带离心法(简称区带离心法)
区带离心法是样品在一惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。该法的优点是:①分离效果好.可一次获得较纯颗粒;②适用范围广.既能分离具有沉降系数差的颗粒.又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点是:①离心时间较长;②需要制备梯度;③操作严格，不易掌握。区带离心法又可分为差速区带离心法〔动态法或沉降速率法)和等密度离心法(平衡法或沉降平衡法)。
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(一）差速离心法
采用逐渐增加离心速率或低速与高速交替进行离心，使沉降速率不同的颗粒，在不同离心速率及不同离心时间下分批离心的方法，称为差速离心法。差速离心一般用于分离沉降系数相差较大的颗粒。进行差速离心时.首先要选择好颗粒沉降所需的离心力和离心时间，离心力过大或离心时间过长，容易导致大部分或全部颗粒沉降及颗粒被挤压损伤。当以一定离心力在一定的离心时间内进行离心时，在离心管底部就会得到最大和最重颗粒的沉淀，进一步加大转速对分出的上清液再次进行离心，又得到第二部分较大、较重颗粒的沉淀及含更小而轻颗粒的上清液。如此多次离心处理，即能把液体中的不同颗粒较好地分离开。此法所得沉淀是不均一的，仍混杂有其他成分，需经再悬浮和再离心（2一3次)，才能得到较纯的颗粒。差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。其优点是:操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子。缺点是:①分离效果差，不能一次得到纯颗粒;②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀;③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。
(二)密度梯度区带离心法(简称区带离心法)
区带离心法是样品在一惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。该法的优点是:①分离效果好.可一次获得较纯颗粒;②适用范围广.既能分离具有沉降系数差的颗粒.又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点是:①离心时间较长;②需要制备梯度;③操作严格，不易掌握。区带离心法又可分为差速区带离心法〔动态法或沉降速率法)和等密度离心法(平衡法或沉降平衡法)。
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来源： 时间：2016-4-20 14:52:36
